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| Aportaciones al diagnóstico serológico de moquilloRESUMEN:En este trabajo hemos intentado facilitar al Clínico, la interpretación de resultados según los títulos serológicos obtenidos mediante la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta que detecta inmunoglobulinas IgG e IgM y la técnica de Inmunofluorescencia Directa. Exponemos los resultados obtenidos de titular las inmunoglobulinas en 90 animales con Moquillo canino. Si se obtiene un resultado positivo a IgM que no pueda achacarse a una vacuna aplicada en los 30 días anteriores, el animal padece Moquillo. Es aconsejable titular las IgG para establecer el pronóstico. Si se obtiene ausencia de IgM y ausencia de IgG se debe extraer LCR para proceder a IFI o IFD según sea el cuadro agudo o crónico, y confirmar el resultado positivo o no. Si se obtiene ausencia de IgM en presencia de títulos de IgG y alcanzan valores de 1/640 el animal padece Moquillo. Si el valor de IgG es igual o inferior a 1/320 se debe interpretar cada caso individualmente considerando la última vacunación. INTRODUCCIÓNEn los últimos años el número de animales que presentan síntomas compatibles con los que produce el virus del Moquillo canino ha aumentado. La mayoría son cachorros que no han completado un plan vacunal adecuado y otras veces animales adultos que no han recibido la vacunación anual. Estas situaciones, junto con la virulencia de la cepa, condiciones ambientales y estado inmunitario del paciente, hacen que del 50% al 70 % de las infecciones por moquillo sean subclínicas y que en lugares como criaderos, guarderías, hospitales veterinarios y refugios de las sociedades protectoras de animales sea un reto continuo el diagnóstico de moquillo. MATERIAL Y MÉTODOSEl estudio se ha realizado con muestras de 92 perros que manifiestan, en el momento del diagnóstico, signos de gravedad variable que hacen sospechar al veterinario clínico de la presencia de moquillo. Estos síntomas a veces son completamente inespecíficos como la fiebre o diarrea que aparecen al inicio de la enfermedad, otras veces ya se ha declarado un cuadro respiratorio o un cuadro neurológico grave. Los resultados confirman el diagnóstico presuntivo de moquillo en 90 de los 92 perros estudiados. Las edades de los pacientes van desde los dos meses a los ocho años. No hemos tenido en cuenta el sexo. Las técnicas analíticas utilizadas son:
El procedimiento para la recogida y conservación de muestras es fundamental. Una toma de abundante material y tratada adecuadamente evitará que el laboratorio obtenga resultados erróneos. Para la técnica de I.F.D. se emplean frotis con adecuada celularidad, es decir, que tengan una cantidad celular suficiente que permita el estudio. Las muestras pueden proceder de:
Para la técnica de I.F.I. se utiliza:
RESULTADOSDurante la exposición natural al virus del moquillo el sistema inmunológico canino produce anticuerpos IgM como respuesta temprana a la infección. Por tanto las IgM se detectan en la fase aguda de la enfermedad, del día 7 hasta las 2 semanas siguientes a la exposición al virus. (Figura). Una titulación de IgM mayor o igual a 1/20 nos indica que se ha producido contacto con virus campo en este período de tiempo. Con excepción de los animales que han sido vacunados frente a moquillo en los 10 a 30 días previos a la realización del análisis. Los perros que habían sido vacunados han presentado estos resultados: Titulaciones de IgM entre 1/10 y 1/80. Sólo dos casos vacunados hacía menos de 30 días excedieron el valor 1/80. Titulaciones de IgG hasta valores de 1/320. Como se observa en la figura los títulos de IgM se elevan rápidamente manteniéndose los títulos más altos hasta aproximadamente 15 días tras la exposición del virus. A partir de entonces los títulos de IgM empiezan a decrecer hasta niveles indetectables alrededor del día 25 a 30 tras el contacto. Los títulos de IgG comienzan a elevarse a partir de los 15 días. Según Greene existen tres estados inmunitarios que se relacionan con la evolución de la enfermedad y que se deducen de las titulaciones de IgG de los animales expuestos a virus campo. Nuestros resultados concuerdan plenamente con su descripción. 1- Animales con altos títulos de IgG que confieren protección: Eliminan el virus de la mayoría de los tejidos y no muestran signos clínicos evidentes de la enfermedad o exhiben sintomatología muy leve. Los estudios de las respuestas serológicas al virus del moquillo en perros notobióticos confirman que los títulos de anticuerpos IgG varían de manera inversa a la gravedad de la enfermedad, por consiguiente para predecir la recuperación se deben evaluar los niveles de anticuerpos IgG en lugar de IgM. 2- Animales con títulos intermedios de IgG: Padecerán diseminación del virus a tejidos epiteliales. Los signos clínicos que desarrollan se resuelven con el tiempo y el virus se elimina de la mayoría de los tejidos al aumentar los títulos de anticuerpos. La persistencia del virus en ciertos tejidos como el SNC puede causar signos neurológicos irreversibles. Los animales que no tienen capacidad inmunológica para aumentar los títulos de IgG desarrollarán la enfermedad en un periodo de tiempo que puede ser prolongado. 3- Animales con ausencia de anticuerpos IgG: El virus se disemina sin freno en muchos tejidos, entre ellos epitelio gastrointestinal, respiratorio, glándulas, piel, SNC, y permanece en ellos hasta que produce la muerte. No olvidemos que los animales que han tenido contacto con virus campo pueden ser eliminadores del mismo y contagiar la enfermedad aunque su tasa de IgG sea elevada y les confiera protección. Los resultados propios utilizados en este trabajo se exponen a continuación:
De los 17 animales se ha procedido al estudio del LCR en 6 de ellos. Es especialmente importante para confirmar el diagnóstico en estos casos con ausencia de títulos de anticuerpos. En 4 casos se confirma la sospecha de moquillo, 2 son positivos haciendo IFI del LCR y otros 2 son positivos en IFD del LCR. En 2 casos la IFD del LCR es negativa confirmando en estos casos que los pacientes no han tenido contacto con el virus del moquillo. Ambos presentan síntomas neurológicos, la causa que los provoca en uno de ellos se identifica al resultar positivo a toxoplasma IgM, actualmente está sano. Del otro animal no conocemos el diagnóstico definitivo. Observar en la tabla que los 3 casos que viven incluyen estos 2 que no padecen moquillo. Luego de los 15 animales que son enfermos de moquillo y no tienen titulación sabemos que mueren 7 y sabemos que vive 1 solamente. Tabla 2: IgG AUSENCIA. IgM 1 /20 - 1 / 160
Son animales que han estado expuestos al virus del moquillo y se consideran positivos. Los animales que conocemos su evolución han muerto todos, aunque hayan recibido tratamiento. Hay ausencia de titulación de IgG protectora. De los 5 pacientes vacunados sólo fallece uno y entre los 4 no vacunados se producen tres muertes. Tabla 3: IgG 1/10 - 1/160, IgM AUSENCIA
La interpretación de los casos con ausencia de título IgM es difícil, sobre todo en los animales que han sido vacunados. En estas situaciones para la confirmación del diagnóstico de moquillo se tiene que realizar seroconversión a los 10-15 días para observar la evolución de los anticuerpos. Tabla 4: IgG 1/320 - 1/1280, IgM AUSENCIA
En este grupo los elevados títulos de IgG son diagnósticos de la enfermedad. Además confieren protección al paciente por lo que encontramos que hay mayor supervivencia, produciéndose la muerte sólo en una caso con titulación de 1/640. Tabla 5: IgG 1/40 - 1/640 . IgM 1/20 - 1/320
Todos los animales de este grupo han estado en contacto con virus campo ya que son IgM positivos. Los 7 animales de este grupo que fallecen presentan títulos de IgG igual o inferior a 1/320 y no habían sido vacunados. Tabla Nº6. Tabla 6: RELACION DE IgG Y MUERTE
De los casos estudiados en once se realizó IFD de conjuntiva o sangre periférica con resultado positivo en seis casos. Tabla 7: RELACION DE TITULOS DE ANTICUERPOS CON IFD
DISCUSIÓNEl conocimiento del estado de vacunación de cada animal ha sido importante para establecer una correcta interpretación de los resultados. Los animales que presentan un título de IgM igual o superior a 1/20 han estado expuestos al virus de moquillo, y se consideran títulos diagnósticos, en acuerdo con las publicaciones de Black J.W. En estos casos la determinación conjunta de IgG aporta información sobre el grado de protección del animal y su posible evolución. Los animales con títulos de IgG entre 1/10 y 1/320 son poblaciones de riesgo de muerte. En nuestro estudio hemos encontrado una relación directa entre títulos de IgG con la supervivencia: títulos iguales o superiores a 1/640 indican que el animal produce mayor respuesta inmunológica frente al virus. En los animales que no presentan titulación de IgM e IgG se recomienda la obtención de LCR, para detectar antígeno en las fases agudas o anticuerpos en las fases crónicas, que contribuye al diagnóstico inequívoco de moquillo. También se puede realizar la seroconversión al cabo de 10 - 15 días. Encontramos relación entre titulación positiva de IgM con IFD positiva de sangre periférica y epitelio conjuntival tal como han publicado otros autores. CONCLUSIONESCon nuestros años de experiencia concluimos que se puede establecer un diagnóstico preciso en todo perro infectado por el virus del Moquillo, y una evolución previsible de la enfermedad, utilizando para cada cuadro clínico las técnicas más adecuadas. De la interpretación de los resultados pueden extraerse las siguientes conclusiones:
BIBLIOGRAFÍA
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