PCR-Leishmania

PCR-Leishmania apoyo rutinario al diagnóstico de la leishmaniosis canina y felina

¿Qué es la PCR?

Es la amplificación de un fragmento específico de ADN de Leishmania en un tubo de ensayo donde se encuentra la muestra clínica. Es decir, permite detectar al agente infeccioso mediante la amplificación de su ADN. La sola presencia de ADN no es indicativo de que exista parásito vivo, para ello habría que recurrir a la detección de RNA mediante RT-PCR (Reverse Transcriptase – PCR).

¿Cómo debo interpretar los resultados de una PCR?

Si la PCR es positiva, es muy probable que el paciente tenga esa infección concreta (si la técnica se ha realizado con los controles adecuados). En la mayoría de los casos, la única manera de tener ADN de la Leishmania en la muestra es que el perro/gato tenga una infección activa. 

Si la PCR es negativa, sólo significa que el ADN del parásito no está presente en la muestra que se ha analizado, pero eso no significa que Leishmania no esté en el perro/gato del cual se ha tomado la muestra.

¿Existen falsos positivos en la PCR?

Los falsos positivos (la prueba es positiva pero Leishmania no está presente en el perro/ gato) pueden ocurrir por varios motivos. La causa más frecuente es la contaminación, cuya fuente más común son las amplificaciones resultantes de las PCR realizadas previamente en el laboratorio. Presencia del parásito muerto en el paciente por las defensas inmunológicas u otros motivos.

¿Existen falsos negativos en la PCR?

Los falsos negativos (la prueba es negativa pero la Leishmania está presente en el perro/gato) pueden ocurrir con la PCR en los casos en que el volumen de la muestra sea demasiado pequeño, la muestra no es la adecuada, el parásito no se replica en la muestra obtenida y empleo de inhibidores de la PCR como la heparina o formol. 

¿Qué muestras podemos enviar para realizar una PCR?

La amplificación del ADN se puede realizar sobre casi cualquier muestra o material clínico obtenido, como sangre o médula ósea (conservadas en EDTA o citrato), ganglio linfático, saliva, orina, LCR, humor acuoso, exudados, raspados cutáneos o conjuntivales y biopsias de diferentes tejidos u órganos.

¿Cuál es la mejor muestra clínica para el diagnóstico o el seguimiento mediante PCR?

La elección de la muestra para el diagnóstico o seguimiento de un perro con leishmaniosis es una decisión clínica. 

Si lo que se quiere es hacer un diagnóstico, hay que seleccionar la muestra clínica donde creamos que vamos a encontrar más leishmanias:

• Si el cuadro clínico es marcadamente cutáneo o muco-cutáneo: aspirados de nódulos, pápulas, ulceras, fistulas, alopecias con descamación y también de médula ósea, sangre periférica…, etc
• Si el cuadro clínico es más heterogéneo, probablemente el aspirado de médula ósea, la sangre periférica o el aspirado de ganglio, por este orden.

De los datos publicados la mayor sensibilidad la obtendremos de médula ósea, la sangre periférica en general da una menor sensibilidad, sobre todo en las formas crípticas de la infección.

¿La serología pierde su valor en el diagnóstico de la leishmaniosis canina con la llegada de la PCR?

La respuesta es NO, la serología es una de las técnicas más utilizadas en el diagnóstico de la leishmaniosis. La presencia de anticuerpos nos indica que se ha activado la respuesta inmunitaria humoral (linfocitos B) y en consecuencia también la celular (linfocitos Th).

Las técnicas de DAT, IFI, ELISA nos informan del título de anticuerpos que ha producido el animal frente al agente infeccioso. Las muestras clínicas más utilizadas son suero, plasma, LCR, humor vítreo, orina.

Es muy importante recordar que una cosa es un animal infectado por Leishmania y otra bien distinto un animal con leishmaniosis. 

¿Es la PCR la solución definitiva a todas las dificultades en el diagnóstico de la leishmaniosis canina?

La respuesta es NO. 

Lo correcto sería siempre hacer una serología de referencia DAT / IFI y PCR. De esta forma no solamente sabríamos que existe ADN del parásito, sino también si se ha activado la respuesta inmunitaria. Lo cual nos guiará en el enfoque terapéutico del tema.

Además, resolvemos los casos de baja sensibilidad específica de las técnicas serológicas, es decir el punto de corte.

¿En qué facetas de la clínica podemos aplicar la PCR?

La PCR se está aplicando en tres grandes campos:

• En el diagnóstico etiológico, para mejorar la eficacia diagnóstica complementando los métodos serológicos convencionales: DAT, IFI, ELISA 
• En el control del tratamiento
• En la caracterización genética del parásito (genotipificación) e identificación de mutaciones determinantes de resistencias a fármacos o de virulencia. En este caso hay que recurrir a técnicas moleculares mas complejas.

 

Dr. Mariano J. Morales Amella

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